Cette formation complète a une finalité très appliquée.
A l\'issue du stage, les participants seront en mesure :
de maîtriser la théorie du binding, de planifier et de réaliser des expériences de base.
de concevoir une stratégie expérimentale fondée sur les concepts théoriques et méthodologiques généraux du binding et d\'évaluer l\'impact des paramètres mis en jeu.
d\'évaluer les avantages et inconvénients de diverses méthodes de binding dans le but de valider des conditions originales destinées au criblage de molécules sur des cibles connues ou encore peu caractérisées.
Chercheurs et techniciens désirant maîtriser les aspects théoriques et méthodologiques de l\'étude des interactions ligand-récepteur (binding). A défaut d\'une expérience acquise (même préliminaire) dans le domaine du \'\'binding\'\', des connaissances de base en pharmacologie, biochimie et/ou enzymologie sont souhaitables.
Programme :
1. Notion évolutive de récepteur fonctionnel : de la communication cellulaire à la structure de protéines réceptrices et de complexes ligand-récepteur (Récepteurs couplés aux protéines G et récepteurs à tyrosine-kinase en particulier).
2. Bases pharmacologiques des interactions ligand-récepteur. Importance du lien liaison-fonction. Notions d\'agonisme, d\'antagonisme, d\'efficacité et d\'interconversion entre états conformationnels et fonctionnels.
3. Analyse quantitative des interactions ligand-récepteur : de la théorie à la pratique.
4. Méthodes d\'investigation des interactions ligand-récepteur et exemples d\'application : méthodes séparatives et non séparatives, méthodes impliquant des outils radioactifs, fluorescents ou non marqués, méthodes basées sur des variations de concentration, de masse, de distance, de polarisation ou de durée de vie.
5. Examen détaillé des propriétés du matériel biologique (membranes, cellules, récepteurs recombinants ou chimériques, localisation, recyclage, ...) et des ligands (marqués ou non, propriètés physico-chimiques), en relation avec les techniques utilisées et la fonctionnalité du récepteur.
6. Point de vue d\'expérimentateurs.
a) Analyse et optimisation des paramètres expérimentaux requis pour la mise en place et la validation d\'un essai de liaison à un GPCR par FRET.
b) Etude des interactions antigène-anticorps et apport de la technique SPR (résonnance plasmonique de surface, \'\'Biacore\'\'). Les nombreuses applications des anticorps en tant qu\'outils biotechnologiques ou thérapeutiques seront revues.
7. Présentation-débat et partage d\'expériences (positives ou négatives) acquises sur des techniques répandues ou en développement.
Informations complémentaires :
Méthodes pédagogiques
Ce stage est constitué de cours théoriques illustrés par des séances de travaux dirigés interactives entre stagiaires et animateurs. De nombreux résultats expérimentaux non publiés ou issus de la littérature seront soumis aux stagiaires qui seront amenés à les analyser et à les discuter.
Les stagiaires qui le souhaitent pourront discuter de leurs problèmes spécifiques.
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