Université Paris Cité
Electrophorèse SDS-Page et native-page - Chimie
Certification / expertise
17 heure(s)
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Objectifs
Présentation - Electrophorèse SDS-Page et native-page - ChimieObjectifs
- Connaissance de la pratique et des aspects théoriques de la séparation des molécules par les différents types d’électrophorèse.
Compétences visées
- A l’issue de la formation, l’apprenant est capable de choisir et mettre en œuvre les types d’électrophorèse adéquat en fonction des informations recherchées et de la protéine d’intérêt.
Public visé
- Technicien.ne.s, ingénieur.e.s,
- chercheur.e.s des entreprises et des collectivités dans les domaines des sciences du vivant.
Programme
Partie théorique : Structure des protéines et technique d’électrophorèse :La partie théorique porte sur la description et la compréhension de la nature et de la structure des gels d'électrophorèse (conditions natives et dénaturantes). Elle traite également des phénomènes de migration des molécules (des protéines, en particulier) dans ces différents types de gel. Les différentes informations obtenues par cette technique (masse moléculaire apparente des protéines, interactions protéine/protéine, informations structurales, etc.) seront également traitées.
Partie pratique :
- Matériel utilisé/préparation de gels natifs et gels dénaturants et échantillons.
- Mise en œuvre des techniques : Migrations et diverses colorations.
- Analyse des résultats :
La partie pratique permet de réaliser des gels d'électrophorèse en conditions dénaturantes et natives.
- En conditions dénaturantes (SDS-PAGE) : Des gels de réticulation variée (8% à 16% d’acrylamide) seront coulés et utilisés pour faire migrer différents types de protéines. Plusieurs méthodes de révélation des protéines seront utilisées : Bleu de Coomassie, nitrate d’argent et/ou SYPRO-Ruby. Des essais de renaturation des protéines en gel seront réalisés et la renaturation sera testée par activité enzymatique sur gel.
- En conditions natives (Native-PAGE) : Des conditions de pH variables seront testées pour couler les gels et 3 protéines différentes seront déposées sur les gels. La révélation se fera par mise en évidence de l’activité enzymatique des protéines sur gel.
Des modifications mineures peuvent être apportées sous la responsabilité de l’encadrement pédagogique.
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En résumé
Objectif
Certification / expertise
Durée
17 heure(s)
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