Université Paris Cité
PCR quantitative en temps réel - Biologie
Certification / expertise
28 heure(s)
1650 € TTC
Université
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Objectifs
Présentation : PCR quantitative en temps réel - Biologie- Comprendre la théorie de la PCR quantitative en temps réel afin de pouvoir l’appliquer à une étude transcriptomique : Calcul du niveau d’expression d’un gène (ARNm) par différentes façons.
- Normalisation des résultats par le(s) « bon(s) » gène(s) non régulé(s) par l’expérience, comment le(s) choisir de façon mathématique (geNorm). Le but de cette formation est de donner toutes les clefs pour réaliser cette étude : Depuis l’extraction des ARN (théorie et pratique), la Transcription Inverse (théorie), jusqu’à l’exploitation critique des résultats par différentes approches (quantification absolue versus quantification relative), en passant par la recherche de séquence nucléotidique des gènes et le design des amorces spécifiques .
- Les différentes chimies de détection seront abordées à savoir les fluorophores (SYBR Green I), les sondes d’hydrolyse (Taqman, 3’MGB, UPL) et les sondes d’hybridation (Beacon, Scorpio, FRET).
Compétences visées :
Connaissance des bases théoriques et pratiques de la RT PCRq, choix des amorces, application transcriptomique : Etude de l’expression des gènes, de la conception expérimentale à l’analyse critique des résultats.
Public visé
- Technicien.ne.s, ingénieur.e.s et chercheur.e.s des entreprises et des collectivités dans le domaine des sciences du vivant.
- Conditions d’ouverture : 6 inscriptions minimum et 12 maximum
Programme
PARTIE THÉORIQUE :- PCR en temps réel quantitative : Principes et applications.
- Exemples d’applications : Quantification d’ARNm.
- Normalisation du niveau des transcripts par un gène de référence : Méthode mathématique pour choisir le « bon » gène de référence, choix crucial pour les résultats.
- Quantification relative et quantification absolue.
- Choix et calcul des amorces oligonucléotidiques.
- Les différents types de chimie : SYBR Green I, Taqman, FRET, 3’MGB, Scorpio, Beacon, UPL….
- Principes de l’extraction des ARN (principe de base de Chomczynski et Sacci et principe des colonnes), étude de l’intégrité, qualité et quantité des ARN. Théorie de la transcription inverse.
PARTIE PRATIQUE :
- PCR en temps réel quantitative : Quantification du niveau d’expression de gènes.
- Choix et design des amorces oligonucléotidiques : Manuellement, à l’aide d’un logiciel et in silico.
- Recherche de séquences nucléotidiques in silico.
- Extraction d’ARN par un kit. Quantification, vérification de la qualité et de l’intégrité des ARN.
Des modifications mineures peuvent être apportées sous la responsabilité de l’encadrement pédagogique.
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Les prochaines sessions
À Paris
De l'année 2024 à 2025
Centre
Université Paris Cité
5 Rue Thomas Mann
75205 Paris cedex 13
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En résumé
Objectif
Certification / expertise
Durée
28 heure(s)
Coût
1650 € TTC
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