UNIVERSITE DE PARIS

Cytométrie en flux 2 Avancée : De l'analyse au tri - Sciences

Certification / expertise

5 jour(s)

2500 € HT

Université

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Objectifs

Proposer un enseignement interactif et évolutif en fonction des besoins spécifiques des participant.e.s. Après une remise à niveau, les encadrant.e.s chercheront à répondre aux attentes des participant.e.s. Le site de formation permet de mettre en oeuvre des expériences de marquages polychromatiques (Fortessa 15 couleurs), de tri cellulaire en tubes/plaques/lames (ARIA III), sur billes cytométriques à façon (Bioplex 200). Des expériences de cytométrie fonctionnelle peuvent être menées (flux calcique, cycle cellulaire, etc). Un Accuri C6 est également disponible sur le plateau technique.

Savoir-faire et compétences :

  • Connaissance des techniques avancées de cytométrie. Savoir réaliser un tri cellulaire sur un trieur FACS ARIAIII. Savoir analyser des marquages polychromatiques. Savoir réaliser et analyser une expérience à base de billes cytométriques (CBA et/ou Luminex). Savoir réaliser le contrôle qualité des cytomètres BD.
  • Possibilité de mettre en oeuvre des techniques supplémentaires à la demande des participant.e.s (prendre contact avec le responsable au moins 4 semaines avant le début de la formation).
  • Les aspects concernant la sauvegarde des données peuvent être traités.

Public visé

Technicien.ne.s, ingénieur.e.s, chercheur.e.s des entreprises et des collectivités dans le domaine des sciences du vivant.

Programme

Partie théorique :

Les bases de la cytométrie :

  • Introduction.
  • Fluidique.
  • Lasers et détecteurs de morphologie cellulaire.
  • Fluorochromes et détecteurs de fluorescence.
  • Compensations.
  • Les contrôles isotypiques.
  • Analyses.
  • Soft.
  • Contrôle qualité.

Les champs d’application de la cytométrie :

  • Marquage phénotypique (surface et intracellulaire).
  • Cycle cellulaire-Apoptose-Anomalies chromosomiques.
  • Réactions d’oxydation-Signal calcique-Marquage d’organelles.
  • Nouvelles applications : Analyse de la transduction du signal/Fluorescent Bar Coding/Mesure d’analytes solubles/Imaging des cellules en flux/Cytométrie de masse.
  • Fluorescent Activated Cell Sorting.

Partie pratique :

  • Des splénocytes stimulés in vitro seront mis à disposition des participants.
  • Un marquage CFSE ayant été réalisé avant le début de la stimulation, il sera possible d’étudier le nombre de cycles cellulaires effectués par ces cellules en fonction de diverses conditions de culture. Les cytokines présentes dans les surnageants de ces cultures seront étudiées par CBA. Des sous-populations spléniques seront triées par cytométrie en flux.
  • Marquages polychromatiques ≥ 6 couleurs sur BD LSRII avec traitement des compensations.
  • Cytometric Bead Arrays et lecture sur Luminex ou FACSARRAY.
  • Tri cellulaire sur trieur BD ARIA III.
  • Procédures de maintenance.
  • Contrôle qualité des cytomètres.
  • Analyses.
  • Présentations orales.
  • Table ronde et debriefing.

Des modifications mineures peuvent être apportées sous la responsabilité de l’encadrement pédagogique.

 

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En résumé

Objectif

Certification / expertise

Durée

5 jour(s)

Coût

2500 € HT

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Domaine

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