Université Paris Cité
Techniques d'études des interactions protéine-protéine - Biologie
Certification / expertise
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Objectifs
Présentation - Techniques d'études des interactions protéine-protéine - Biologie
Objectifs
- La formation, composée d’une partie théorique et d’une partie pratique, vise à explorer les interactions protéine-protéine et à initier les participant.e.s aux approches expérimentales utilisées pour rechercher de nouveaux partenaires d’une protéine candidate ou pour valider les interactions de partenaires protéiques potentiels. L’objectif de la partie théorique est de présenter la nature biochimique des interactions protéiques et d’aborder les différentes méthodes utilisées pour les analyser, telles que le double hybride dans la levure, la microscopie optique de fluorescence (co-immunolocalisation, FRET, Duolink®…), les méthodes biochimiques (co-immunoprécipitation et pontage moléculaire, capture par « GST-pulldown »…) et la résonance plasmonique de surface. Dans la partie pratique, trois approches expérimentales sont utilisées pour explorer les interactions au sein d’un complexe protéique, avec des expériences en système cellulaire et in vitro : Co-immunoprécipitation : biotinylation, pontage moléculaire par « cross-linker » et immunoprécipitation de protéines de surface cellulaire | « Proximity Ligation Assay » Duolink® | Résonance plasmonique de surface : système BIAcore
Compétences visées
- Etre familiarisé-e aux techniques d’analyse des interactions « protéine-protéine » en explorant ces interactions par différentes approches expérimentales. Apprendre à effectuer (1) une co-immunoprecipitation avec marquage et pontage moléculaire, suivie de Western blot, (2) un immuno-marquage et un PLA (Duolink®) sur cellules vivantes ou fixées, (3) concevoir une analyse par résonance plasmonique de surface.
Public visé
Technicien.ne.s, ingénieur.e.s et chercheur.e.s des entreprises et des collectivités dans le domaine des sciences du vivant.Programme
PARTIE THÉORIQUE :LES DIFFÉRENTS TYPES D’INTERACTIONS PROTÉINE-PROTÉINE.
ANALYSE D’UNE INTERACTION PROTÉINE-PROTÉINE :
- Les méthodes utilisées : Le double hybride dans la levure, la co-immunolocalisation, le FRET, la co-immunoprécipitation et le pontage moléculaire, la capture par « GST-pulldown », la technologie Duolink®.
- L’analyse quantitative en temps réel : La résonance plasmonique de surface.
RECHERCHE DE PARTENAIRES PROTÉIQUES :
- Par crible en double hybride dans la levure.
- Approche protéomique.
PARTIE PRATIQUE :
INTERACTION PROTÉINE-PROTÉINE EN SYSTÈME CELLULAIRE :
- Par co-immunoprécipitation : Viotinylation, pontage moléculaire par « cross-linker » et immunoprécipitation de protéines de surface cellulaire.
- Par la technologie Duolink® basée sur le principe du « Proximity Ligation Assay ».
INTERACTION PROTÉINE-PROTÉINE EN SYSTÈME IN VITRO :
- La résonance plasmonique de surface : Système BIAcore.
- Interaction antigène-anticorps.
- Analyse en temps réel de l’interaction entre deux protéines.
Des modifications mineures peuvent être apportées sous la responsabilité de l’encadrement pédagogique.
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En résumé
Objectif
Certification / expertise
Durée
5 jour(s)
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